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細胞色素氧化酶染色液(對苯二銨法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 15:03:26瀏覽次數:228次

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貨號 FS-X10002
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培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱:細胞色素氧化酶染色液(對苯二銨法)

英文名稱:

產品規格:4×50ml

貨號:FS-X10002

產品介紹:

用途:

細胞色素氧化酶染色

注意事項:

主要由Co孵育液、Lugol碘液、鈷鹽溶液、陰性對照等組成,染色后酶活性部位呈棕綠色。

儲存條件:4℃,避光,6個月

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

*發根土壤桿菌6號染色體開放閱讀框50抗體Human rT3(Reverse Triiodothyronine) 人糖脂抗體(glycolipid)免疫試劑盒

尖槐藤根瘤菌1號染色體開放閱讀框151抗體Human SCG2(Secretogranin II) 人糖盞蛋白免疫試劑盒

黑褐鵝膏菌腫瘤壞死因子受體超家族成員9抗體Human RXFP1(Relaxin/Insulin Like Family Peptide Receptor 1) 人糖原磷化同工MM(GP-MM)免疫試劑盒

高盧根瘤菌復合前列腺特異性抗原單克抗體Human RNASE(Ribonuclease) 人糖原磷化同工II(GP-II)免疫試劑盒

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大腸埃希菌磷化鈣介質抗體Human RARS(Arginyl tRNA Synthetase, cytoplasmic) 人糖類抗原72-4(CA72-4)免疫試劑盒

粘孢白僵菌7號染色體開放閱讀框26抗體Human RARα(Retinoic Acid Receptor Alpha) 人糖類抗原50(CA50)免疫試劑盒

黃曲霉衰變加速因子CD55抗體Human PRR4(Proline Rich Protein 4, Lacrimal) 人糖類抗原19-9(CA19-9)免疫試劑盒

海桿狀菌Marinobacter│sp. 質量規格:活:>200 NADP units/mg,BCc-fos 二氫歐山芹醋酯

假單胞菌Pseudomonas│sp. 質量規格:>98%,BRCDCP1試劑盒二氫魚藤

指狀青霉Penicillium│digitatum 質量規格:>96%,BRCD8分子試劑盒二氫黃連堿
細胞色素氧化酶染色液(對苯二銨法)紅色紅曲 辛基異羥肟可溶性Aβ寡聚體

Erwinia aphidicola  4-(N,N-二甲基)苯溴化鎂溶液抗球蛋白

燕麥狀曲霉 Val-Thr可溶性FMS樣酪激1

間胞囊 4--2-甲基-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶絲狀血球凝集

白蘑菇 (2S,3S)-(+)-2,3-雙(二苯基膦基)雙環[2.2.1]庚-5-烯FK506結合蛋白8

白地霉 (R)-1,4-苯并二噁烷-2-甲Ring1和YY1結合蛋白

冬菇 代三叔丁基磷化金(I)外核三磷二磷水解2

白色鹽多孢 二[(±)-BINAP]二金(I)LIM半胱豐富域蛋白1

紫色團胞鏈霉 水解乳蛋白絲;蘇激26

運動節桿 3'-氨基-2',3'-雙脫氧鳥甘露糖結合凝集2

粘孢白僵 偶氮胂IARMC6

釀酒酵母 4,4'-二苯基-1,1'-聯萘-5,5'-二磺二鹽分裂周期因子42

運動節桿 柳葉酯蛋白激Bα

產黃青霉 砷甜菜堿標準溶液環指蛋白5

藍伏革 Merocyanin 540無翅型MMTV整合位點家族成員7A
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

 


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