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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒(培養(yǎng)體系)

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產(chǎn)品型號(hào)

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-04-18 15:26:38瀏覽次數(shù):152次

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產(chǎn)地 國(guó)產(chǎn) 加工定制
適用領(lǐng)域 科研 貨號(hào) FS-01X9940
干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒(培養(yǎng)體系)公司正在出售的產(chǎn)品:膽道癌組織源性原代細(xì)胞規(guī)格:5 × 105次方(1ml)/1ml
腎癌組織源性原代細(xì)胞規(guī)格:5 × 105次方(1ml)/1ml
膀胱癌組織源性原代細(xì)胞規(guī)格:5 × 105次方(1ml)/1ml

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。

二.細(xì)胞處理:

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于:

產(chǎn)品名稱:干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒(培養(yǎng)體系)    

產(chǎn)品規(guī)格:200ml

貨號(hào):FS-01X9940

保存溫度(℃):2-8℃/-20℃

運(yùn)輸溫度(℃):2-8℃/-20℃   

98.jpg 

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項(xiàng):

1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。

2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。

3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。

6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。

 Cross Linked N-Telopeptide Of Type I Collagen (NTXI)Ⅰ型膠原交聯(lián)基端(NTXⅠ)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 Cross Linked N-Telopeptide Of Type I Collagen (NTXI)Ⅰ型膠原交聯(lián)基端(NTXⅠ)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 Nucleoporin 50kDa (NUP50)50kDa核孔蛋白(NUP50)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 CCAAT/Enhancer Binding Protein Alpha (CEBPa)CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(CEBPα)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 Kallikrein 6 (KLK6)激釋放6(KLK6)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 Kallikrein 8 (KLK8)激釋放8(KLK8)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 Advanced Glycosylation End Product Specific Receptor (AGER)晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(AGER)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 ATP Binding Cassette Transporter G1 (ABCG1)ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G1(ABCG1)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 Regulated On Activation In Normal T-Cell Expressed And Secreted (RANTES)調(diào)節(jié)激活正常T-細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 Thymus Activation Regulated Chemokine (TARC)胸腺激活調(diào)節(jié)趨化因子(TARC)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 Protein Kinase D1 (PKD1)蛋白激D1(PRKD1)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 Protein Kinase D1 (PKD1)蛋白激D1(PRKD1)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 V-Myc Myelocytomatosis Viral Oncogene Homolog (MYC)V-Myc骨髓細(xì)胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 V-Fos FBJ Murine Osteosarcoma Viral Oncogene Homolog (FOS)V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因同源物(FOS)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 V-Jun Sarcoma Virus 17 Oncogene Homolog (JUN)V-Jun肉瘤病毒癌基因同源物(JUN)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 Platelet Derived Growth Factor Subunit B (PDGFB)血小板衍生生長(zhǎng)因子B(PDGFB)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 V-Ha-Ras Harvey Rat Sarcoma Viral Oncogene Homolog (HRAS)V-Ha-Ras肉瘤病毒癌基因同源物(HRAS)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T

 Cluster Of Differentiation 320 (CD320)CD320分子(CD320)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格:48T/96T
干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒(培養(yǎng)體系)BXDC1  BXDC1蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

BXDC2  BXDC2蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

BEND3  BEND3蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

BEND4/CCDC4  BEND4蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

BEND6  BEND6蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

c-ABL1/2(Tyr393/429)  磷化非受體酪c-Abl抗體規(guī)格: 0.1ml

NF-κB p105/p50(Phospho-Ser373)  磷化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體規(guī)格: 0.1ml

phospho-C-Myc(Thr373)  磷化致癌基因C-Myc抗體規(guī)格: 0.2ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。


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