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當(dāng)前位置：上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>科研細(xì)胞>>原代細(xì)胞培養(yǎng)>> 干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒（培養(yǎng)體系）
| 產(chǎn)地 | 國(guó)產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
|---|---|---|---|
| 適用領(lǐng)域 | 科研 | 貨號(hào) | FS-01X9940 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品屬于：
產(chǎn)品名稱：干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒（培養(yǎng)體系）
產(chǎn)品規(guī)格：200ml
貨號(hào)：FS-01X9940
保存溫度（℃）：2-8℃/-20℃
運(yùn)輸溫度（℃）：2-8℃/-20℃
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。 3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性 通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。 4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄 采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。 |
注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。 2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。 3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。 4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。 6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。 7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 |
Cross Linked N-Telopeptide Of Type I Collagen (NTXI)Ⅰ型膠原交聯(lián)基端(NTXⅠ)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Cross Linked N-Telopeptide Of Type I Collagen (NTXI)Ⅰ型膠原交聯(lián)基端(NTXⅠ)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Nucleoporin 50kDa (NUP50)50kDa核孔蛋白(NUP50)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
CCAAT/Enhancer Binding Protein Alpha (CEBPa)CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(CEBPα)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Kallikrein 6 (KLK6)激釋放6(KLK6)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Kallikrein 8 (KLK8)激釋放8(KLK8)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Advanced Glycosylation End Product Specific Receptor (AGER)晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(AGER)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
ATP Binding Cassette Transporter G1 (ABCG1)ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G1(ABCG1)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Regulated On Activation In Normal T-Cell Expressed And Secreted (RANTES)調(diào)節(jié)激活正常T-細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Thymus Activation Regulated Chemokine (TARC)胸腺激活調(diào)節(jié)趨化因子(TARC)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Protein Kinase D1 (PKD1)蛋白激D1(PRKD1)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Protein Kinase D1 (PKD1)蛋白激D1(PRKD1)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
V-Myc Myelocytomatosis Viral Oncogene Homolog (MYC)V-Myc骨髓細(xì)胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
V-Fos FBJ Murine Osteosarcoma Viral Oncogene Homolog (FOS)V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因同源物(FOS)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
V-Jun Sarcoma Virus 17 Oncogene Homolog (JUN)V-Jun肉瘤病毒癌基因同源物(JUN)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Platelet Derived Growth Factor Subunit B (PDGFB)血小板衍生生長(zhǎng)因子B(PDGFB)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
V-Ha-Ras Harvey Rat Sarcoma Viral Oncogene Homolog (HRAS)V-Ha-Ras肉瘤病毒癌基因同源物(HRAS)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Cluster Of Differentiation 320 (CD320)CD320分子(CD320)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒（培養(yǎng)體系）BXDC1 BXDC1蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
BXDC2 BXDC2蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
BEND3 BEND3蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
BEND4/CCDC4 BEND4蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
BEND6 BEND6蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
c-ABL1/2(Tyr393/429) 磷化非受體酪c-Abl抗體規(guī)格: 0.1ml
NF-κB p105/p50(Phospho-Ser373) 磷化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體規(guī)格: 0.1ml
phospho-C-Myc(Thr373) 磷化致癌基因C-Myc抗體規(guī)格: 0.2ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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