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當(dāng)前位置：上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>科研細(xì)胞>>原代細(xì)胞培養(yǎng)>> H9細(xì)胞專用因子Y27632（相關(guān)3）
| 產(chǎn)地 | 國(guó)產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
|---|---|---|---|
| 適用領(lǐng)域 | 科研 | 貨號(hào) | FS-01X9934 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品屬于：
產(chǎn)品名稱：H9細(xì)胞專用因子Y27632（相關(guān)3）
產(chǎn)品規(guī)格：1mg
貨號(hào)：FS-01X9934
保存溫度（℃）：/-20℃
運(yùn)輸溫度（℃）：/-20℃(干冰)
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。 3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性 通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。 4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄 采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。 |
注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。 2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。 3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。 4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。 6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。 7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 |
Cyclical Citrullinated Peptide (CCP)環(huán)胍(CCP)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Cadherin, Osteoblast (CDHOB)造骨細(xì)胞鈣黏蛋白(CDHOB)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Anti-Filaggrin Antibody (AFA)抗絲聚蛋白(AFA)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Antidiuretic Hormone (ADH)抗利尿(ADH)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Anti-Ovarian Antibody (AOAb)抗卵巢抗體(AOAb)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Anti-Type II Collagen Antibody (Anti-CIIAb)抗Ⅱ型膠原蛋白抗體(Anti-CⅡAb)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Nucleoporin 153kDa (NUP153)153kDa核孔蛋白(NUP153)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Mitogen Activated Protein Kinase Kinase Kinase 1 (MAP3K1)絲裂原激活蛋白激激激1(MAP3K1)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Anti-OJ Antibody抗OJ抗體(Anti-OJ)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Anti-Histone Antibody (AHA)抗組蛋白抗體(AHA)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Phospholipase A1 (PLA1)磷脂A1(PLA1)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Nucleoporin 133kDa (NUP133)133kDa核孔蛋白(NUP133)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Fibrinogen Alpha (FGa)纖維蛋白原α(FGα)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Mitogen Activated Protein Kinase 8 (MAPK8)絲裂原激活蛋白激8(MAPK8)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Nucleoporin 155kDa (NUP155)155kDa核孔蛋白(NUP155)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Tetraspanin 27 (TSPAN27)四旋蛋白27(TSPAN27)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Caspase 10 (P10)胱天蛋白10(P10)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
Thioredoxin Binding Protein 2 (TBP2)硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2(TBP2)檢測(cè)試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
H9細(xì)胞專用因子Y27632（相關(guān)3）SKP1 S期激相關(guān)蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
SHFM3 SHFM3蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
ROC1/RNF75 環(huán)指蛋白75抗體規(guī)格: 0.2ml
RIT1 RIT1蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
FbxW2 FbxW2蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Fbxw7/CDC4 Fbxw7蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
FBXW8/FBXO29 FBXW8蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Fbx15 Fbx15蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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