細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：大鼠β胰島素瘤細胞    

產(chǎn)品英文：RIN-m5f

貨號：FS-01X9727

細胞培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%P/S  

生長狀態(tài)：貼壁生長

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

人磷脂A2(PL-A2)ELISA試劑盒英文名稱：Human Phospholipidase A2，PL-A2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人一氧化氮合成(NOS)ELISA試劑盒英文名稱：Human nitric oxide synthase，NOS ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人端粒(TE)ELISA試劑盒英文名稱：Human telomerase，TE ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA試劑盒英文名稱：Human matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B，MMP-9 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人肌激同工MB(CK-MB)ELISA試劑盒英文名稱：Human Creatine Kinase MB isoenzyme，CK-MB ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人前列腺性磷(PAP)ELISA試劑盒英文名稱：Human Prostatic Acid Phosphatase，PAP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)ELISA試劑盒英文名稱：Human Angiotensin converting enzyme，ACE ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人尿蛋白(UP)ELISA試劑盒英文名稱：Human Proteinuria，UP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人水通道蛋白2(AQP-2)ELISA試劑盒英文名稱：Human Aquaporin 2，AQP-2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人肌鈣蛋白T(Tn-T)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Troponin T，Tn-T ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血管內(nèi)皮抑抗體(ES-Ab)ELISA試劑盒 英文名稱：Human anti-Endostatin antibody，ES-Ab ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA試劑盒英文名稱：Human heat shock protein 27，HSP-27 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血管抑/血管穩(wěn)定蛋白(ANG)ELISA試劑盒 英文名稱：Human angiostatin，ANG ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人心型脂肪結(jié)合蛋白(h-FABP)ELISA試劑盒 英文名稱：Human heart fatty acid binding protein，h-FABP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血管舒緩激(BK)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Bradykinin，BK ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人肌球蛋白輕鏈(MLC)ELISA試劑盒英文名稱：Human Myosin light Chain，MLC ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人α-輔肌動蛋白3(ACTN-3)ELISA試劑盒英文名稱：Human α-Actinin 3，ACTN-3 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒 英文名稱：Human high sensitivity C-Reactive Protein，hs-CRP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠β胰島素瘤細胞Rex1/Zinc finger protein 754  鋅指蛋白754抗體規(guī)格: 0.1ml

PIWIL3  piwi樣3蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

VGF/Nerve growth factor inducible  神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

pan methyl Lysine  泛甲基賴抗體規(guī)格: 0.2ml

DAP1  死亡相關(guān)蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

Adenylosuccinate Lyase  腺琥珀裂解抗體規(guī)格: 0.2ml

HIPK2  Fas相互作用蛋白激2抗體規(guī)格: 0.2ml

Glutamine PRPP amidotransferase  磷核糖基焦磷酰基轉(zhuǎn)移規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。