細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：卵巢內(nèi)膜細(xì)胞    

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號：FS-01X9849

產(chǎn)品類型：原代細(xì)胞

單位：T25/瓶

提供細(xì)胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

大鼠纖溶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

大鼠纖溶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒英文名稱：Rat plasminogen activator inhibitor,PAI ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Fibrinogen Degradation Product,FDP ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒英文名稱：Rat thrombomodulin,TM ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒英文名稱：Rat platelet-derived growth factor,PDGF ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒英文名稱：Rat oxidized lowdensity lipoprotein,OxLDL ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

大鼠血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒英文名稱：Rat platelet activating factor,PAF ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠Ⅲ型前膠原基端(PⅢNT)ELISA試劑盒英文名稱：Rat procollagen Ⅲ N-terminal peptide,PⅢNT ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

大鼠Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Collagen Type Ⅲ,Col Ⅲ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒英文名稱：Rat C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠組織多抗原(TPA)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Tissue Polypeptide Antigen,TPA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠組織型纖溶原激活劑(t-PA) ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Tissue-type Plasiminogen Actilyse,t-PA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠組織因子(TF)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Tissue factor,TF ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠維生D(VD)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Vitamin D,VD ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠維生K1(VK1)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Vitamin K1,VK1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠維生B12(VB12)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Vitamin B12,VB12 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠維生D3(VD3)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Vitamin D3,VD3 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠維生D2(VD2)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Vitamin D2,VD2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
卵巢內(nèi)膜細(xì)胞WAPL  EBV核蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml

CAPD3/hCAP-D3  濃縮2復(fù)合亞基D3抗體規(guī)格: 0.2ml

AMSH  信號轉(zhuǎn)導(dǎo)銜接結(jié)合蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

ASB3  錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號抑制物盒蛋白家族3抗體規(guī)格: 0.2ml

EIF2C1/Ago1  真核翻譯起始因子2C1抗體規(guī)格: 0.2ml

Anillin  胞環(huán)蛋白肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

BIN3  細(xì)胞骨架銜接蛋白BIN3抗體規(guī)格: 0.2ml

CCDC11  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。