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實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
產品名稱 | 分類 | 貨號 |
人細小病毒B19核酸檢測試劑盒 | 熒光PCR法 | FS-P10173 |
PCR技術的定量原理:?
擴增曲線
在Real-time qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環數的增加,最終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據最終的PCR產物量不能計算出初始模板量。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
DSMZ20259模式菌株: no安全等級: 1種屬: Streptococcus│thermophilus奶提供形式: 凍干物用于益生菌類保健食品。培養基: CM0790
根瘤菌固氮模式菌株: no雨樹根瘤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: 63生長條件: 28-30
粗壯假絲酵母生長條件: 25℃培養基: 0013提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
-98℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
釀酒酵母培養基: CM0077用于啤酒。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法
谷氨棒桿菌培養基: CM0002產谷氨。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法;定期移植法
煙曲霉產生真菌素模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: CM0014生長條件: 26C
光硬皮馬勃培養基: 17模式菌株: no子實體提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 28 定期移植法
嗜鹽潮間帶桿菌海洋細菌模式菌株: no水樣/上層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 471生長條件: 15℃
豬鏈球菌研究模式菌株: no鼻腔拭子提供形式: 凍干物安全等級: 2培養基: 396生長條件: 37
-99℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
龐蒂亞克亞硫鹽桿菌培養基: 471南大西洋細菌沉積物/TVMC沉積物(0-3cm)提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
米曲霉產蛋白酶模式菌株: no醬曲提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: CM0014生長條件: 25~28℃
鯊魚弧菌培養基: 467potential antifouling 潛在的抗污損活性水樣/上層海水提供形式: 斜面培養物模式菌株: no生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
假交替單胞菌培養基: 821產酶微生物/產蛋白酶菌株 產酶微生物/蛋白酶、脂酶(三丁甘油酯)沉積物/深灰色沉積物提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
沙門氏菌流行病學調查和細菌耐藥性檢測模式菌株: no雞拭子提供形式: 斜面培養物;凍干物安全等級: 2培養基: 2生長條件: 37℃
曙紅亞甲藍瓊脂培養基(EMB)2250g藥品中大腸桿菌、沙門氏菌檢測。
Nutirent Broth No.2 2 號營養肉湯 Oxoid 500g incubation media Nutirent Broth No.2 2 號營養肉湯 Oxoid 500g
釀酒酵母 支/瓶
山梨醇麥康凱瓊脂基礎(SMAC)250g大腸桿菌O離培養
CaseinDigestSoyLecithinPolysorbate20Medium
卵黃甘露醇高鹽瓊脂基礎 Egg-Yolk Mannitol Salt Agar Base 250克 金黃色葡萄球菌的分離培養
改良Giolitti-Cantobi肉湯 Modified Giolitti-Cantobi Broth 250克 金黃色葡萄球菌的增菌培養
甘露醇鹽瓊脂 Mannitol Salt Aga 250克 金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養
卵黃瓊脂培養基 Egg-Yolk Salt Agar 250克 金黃色葡萄球菌的選擇性分離
人細小病毒B19核酸檢測試劑盒變形桿菌成套生化鑒定管(BXWS)規格:13種*1套/盒*10盒用途:用于變形桿菌的生化鑒定。組成:尿素酶1支、丙氨酶1支、西蒙氏枸櫞鹽1支、鳥氨脫羧酶1支、氨基脫羧酶對照1支、明膠生化管1支、脂酶(玉米油) 1支、D-甘露醇1支、色氨肉湯1支、麥芽糖1支、木糖1支、水楊苷1支、七葉苷水解1支、無菌液體石蠟1支。
DL-色氨規格:5g用途:微生物指示劑
含青霉素酶TSA培養基平板(7cm)規格:10個/包用途:用于環境、器皿、設備和表面的無菌檢測
麥芽糖發酵管規格:20支詳情介紹
玉米粉瓊脂規格:250g用途:用于真菌培養
乳糖-明膠培養基規格:95g用途:產品說明及用途
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