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產地 | 國產 | 加工定制 | 是 |
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適用領域 | 科研 | 貨號 | FS-01X9971 |
產品屬于:
產品名稱:原代T淋巴細胞培養體系
產品規格:100ml/500ml
貨號:FS-01X9971
保存溫度(℃):2-8℃/-20℃
運輸溫度(℃):2-8℃/-20℃
細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。 |
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。 4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。 |
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Signal Recognition Particle 9kDa (SRP9)9kDa信號識別顆粒(SRP9)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Granulocyte Specific Anti-Nuclear Antibody (GSANA)粒細胞特異性抗核抗體(GSANA)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Thyroid Hormone Autoantibody (THAA)甲狀腺自身抗體(THAA)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Cyclin Dependent Kinase 5 (CDK5)周期依賴性激5(CDK5)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Prostaglandin Endoperoxide Synthase 2 (PTGS2)環加氧2(PTGS2)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Dickkopf Related Protein 1 (DKK1)Dickkopf相關蛋白1(DKK1)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Hydroxylysine (Hyl)羥賴(Hyl)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Metallothionein 3 (MT3)金屬硫蛋白3(MT3)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Membrane Protein, Palmitoylated 5 (MPP5)棕櫚酰化膜蛋白5(MPP5)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Endomorphin 2 (EM2)內2(EM2)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Mucin 5 Subtype AC (MUC5AC)粘蛋白5AC(MUC5AC)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
8-Hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG)8-羥基脫氧鳥(8-OHdG)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Phospholipase A2, Cytosolic (cPLA2)胞漿型磷脂A2(cPLA2)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Melatonin (MT)褪黑(MT)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Cross Linked C-Telopeptide Of Type I Collagen (CTXI)Ⅰ型膠原交聯羧基端(CTXⅠ)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Glucokinase (GCK)葡萄糖激(GCK)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Homing Associated Cell Adhesion Molecule (HCAM)歸巢關聯細胞黏附分子(HCAM)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
Amyloid Beta Peptide 1-42 (Ab1-42)淀粉樣蛋白β1-42(Aβ1-42)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格:48T/96T
原代T淋巴細胞培養體系TRPM3 瞬時受體電位離子通道蛋白3抗體(M亞家族)規格: 0.2ml
TRPM5 瞬時受體電位離子通道蛋白5抗體(M亞家族)規格: 0.2ml
TRPM6 瞬時受體電位離子通道蛋白6抗體(M亞家族)規格: 0.2ml
TRPM1 瞬時受體電位離子通道蛋白1抗體(M亞家族)規格: 0.2ml
TRPM4 瞬時受體電位離子通道蛋白4抗體(M亞家族)規格: 0.2ml
DIS3L 有絲分裂控制樣蛋白DIS3L抗體規格: 0.2ml
DIS3L2 有絲分裂控制蛋白樣DIS3L2抗體規格: 0.2ml
DOM3Z DOM3Z蛋白抗體規格: 0.2ml
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