當前位置:上海撫生實業有限公司>>科研細胞>>原代細胞>> 主動脈外膜成纖維細胞
產地 | 國產 | 加工定制 | 是 |
---|---|---|---|
適用領域 | 科研 | 貨號 | FS-01X9774 |
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
產品屬于:
產品名稱:主動脈外膜成纖維細胞
產品規格:5×105
貨號:FS-01X9774
產品類型:原代細胞
單位:T25/瓶
提供細胞鑒定:提供免疫熒光鑒定報告
保存培養溫度(℃):37
運輸溫度(℃):常溫
細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。 |
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。 4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。 |
人腎上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒英文名稱:Human adrenal cortex antibody,ACA ELISA Kit規格:96T/48T
人抗腎小球基底膜抗體(GBM)ELISA試劑盒英文名稱:Human glomerular basement membrane antibogy,GBM ELISA Kit規格:96T/48T
人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA試劑盒英文名稱:human β2-microglobulin,BMG/β2-MG ELISA Kit規格:96T/48T
人膜聯蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒 英文名稱:Human Annexin Ⅴ,ANX-Ⅴ ELISA Kit 規格:96T/48T
人抗腎小管基底膜抗體(TBM)ELISA試劑盒英文名稱:Human tubular basement membrane antibogy,TBM ELISA Kit規格:96T/48T
人apelin 13(AP13)ELISA試劑盒 英文名稱:Human apelin 13,AP13 ELISA Kit 規格:96T/48T
人Apelin 36(AP36)ELISA試劑盒英文名稱:Human Apelin 36,AP12 ELISA Kit規格:96T/48T
人血管緊張Ⅱ受體Ⅰa型(AgtrⅠa)ELISA試劑盒英文名稱:human angiotensin Ⅱ receptor type Ⅰa,AgtrⅠa ELISA Kit規格:96T/48T
人血管生成樣蛋白3(ANGPTL3)ELISA試劑盒英文名稱:Human angiopoietin-like protein 3,ANGPTL3 ELISA Kit 規格:96T/48T
人α肌動蛋白(α Actin)ELISA試劑盒英文名稱:Human Alpha-Actin,α Actin ELISA Kit規格:96T/48T
人心肌錨蛋白重復域1(ANKRD1)ELISA試劑盒英文名稱:Human cardiac ankyrin repeat domain 1,ANKRD1 ELISA Kit規格:96T/48T
人瘦受體(LEPR)ELISA試劑盒 英文名稱:Human Leptin Receptor,LEPR ELISA Kit規格:96T/48T
人血管緊張Ⅱ受體2(AT2R)ELISA試劑盒英文名稱:Human Angiotensin Ⅱ Receptor 2,AT2R ELISA Kit 規格:96T/48T
人血管緊張Ⅱ受體1(ANGⅡR-1)ELISA試劑盒英文名稱:Human angiotension Ⅱ receptor 1,ANGⅡR-1 ELISA Kit規格:96T/48T
人血管生成4(ANG-4)ELISA試劑盒 英文名稱:Human Angiopoietin 4,ANG-4 ELISA Kit 規格:96T/48T
人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)ELISA試劑盒英文名稱:Human soluble myosin heavy chain 1,sMHC-1 ELISA Kit規格:96T/48T
人熱休克因子1(HSF-1)ELISA試劑盒 英文名稱:Human Heat Shock Factor 1,HSF1 ELISA Kit規格:96T/48T
人血管活性抑制劑(VPI)ELISA試劑盒 英文名稱:Human vasopeptidase inhibitors,VPI ELISA Kit規格:96T/48T
主動脈外膜成纖維細胞PDC6I/Alix 調亡誘導因子6相互作用蛋白/多巴受體相互作用蛋白4抗體規格: 0.2ml
PEF1 調亡誘導因子家族蛋白PEF1抗體規格: 0.2ml
PHAPI2/APRIL 性核磷蛋白32家族B抗體規格: 0.2ml
DRAK1/STK17A /蛋白激17A抗體(DAP凋亡誘導蛋白激1)規格: 0.2ml
ERN2 內質網核信號轉導蛋白2抗體規格: 0.2ml
A1BG α1B糖蛋白抗體規格: 0.2ml
A1CF/Apo B RNA editing protein 載脂蛋白B-mRNA編碼蛋白抗體規格: 0.2ml
FASTKD1 Fas活化激結構域蛋白1抗體規格: 0.2ml
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責,儀表網對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示:為規避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。