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小鼠elisa檢測試劑盒試驗標本收集方法

時間:2018/4/16閱讀:245
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小鼠elisa檢測試劑盒試驗標本收集方法
1、將抗原和淋巴細胞在體外混合,刺激并預孵育,是通用的方法。預孵育的淋巴細胞,在置入ELISPOT板之前應使用復溫到37℃的培養液清洗細胞1-2次。置入ELISPOT板以后通常在37℃培養5~6小時。
2、對于高度特異性抗原,可以采用將淋巴細胞和抗原同時加入ELISPOT板孔中,37℃培養箱中,同步進行刺激、培養、和細胞因子捕獲。淋巴細胞板內同步刺激培養的時間通常為22~24小時。
3、ELISPOT試驗檢測的是每一個分泌細胞因子的活化細胞。在培養細胞過程中,任何移動、震動(包括開關培養箱門)都會導致細胞在培養板上的移動,從而得到不規則斑點或者斑點花紋,影響zui終結果。因此細胞在ELISPOT培養板孵育的過程中,應注意保持培養板的靜置,不應對其移動。
4、在使用抗原刺激淋巴細胞培養過程中發現培養液變黃,這種現象通常見于使用很強的多克隆抗原刺激淋巴細胞,某些多克隆抗原會導致淋巴細胞凋亡或者死亡,大量淋巴細胞死亡后使培養液變黃。使用這些淋巴細胞進行后續ELISPOT試驗通常得到很低的斑點(SPOT)形成。換用特異性抗原后可以避免該現象。
5、在ELISPOT結果中出現不規則的大塊斑點,有的區域沒有斑點的原因,不規則斑點區域的出現一般是細胞分離不*所至,有時候采用多克隆抗原孵育的淋巴細胞也會產生成團現象。請確認加入到ELISPOT板中進行孵育的是單細胞懸液。
6、使用開口較大的吸頭,動作輕柔,避免對細胞的吹打,減少剪切力對淋巴細胞的傷害。
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