①準備安培管 

   用于真空冷凍菌種保藏的安培管宜采用中性玻璃制造，形狀可用長頸球形底的，亦稱淚滴型安培管。大小要求外徑6～7.5mm，長105 mm，球部直徑9～11 mm，壁厚0.6～1.2 mm，也可用沒有球部的管

②準備菌種 

   用真空冷凍干燥法保藏的菌種保藏期可長達幾年甚至幾十年，為了不出現差錯，所用菌種純度要高，而且菌齡要適宜。細菌和酵母菌的菌齡要求超過對數生長期，若用對數生長期的菌種進行保藏，其存活期反而降低。一般細菌的菌齡要求24～48h；酵母菌為3d；形成孢子的微生物則宜保藏孢子；放線菌和絲狀真菌菌齡為7～10d。

③制備菌懸液與分裝 

   以細菌斜面為例，用脫脂牛乳2mL左右加入試管中，制成濃菌液，每支安培管分裝0.2mL。

狀安培管。塞好棉塞，在壓力0.11MPa，溫度121℃條件下滅菌30min后備用。

④冷凍 

   微生物菌種用凍干機，上海拓紛有成套的裝置出售，可直接真空冷凍干燥（直接在凍干機內原位干燥，④和⑤步驟結合）。

   此處介紹的是簡易的方法與裝置，可達到同樣的目的。
⑤真空干燥 

   為在真空干燥時使樣品保持凍結狀態，需準備冷凍槽，槽內放碎冰和食鹽，混合均勻，可冷至－15℃。安培瓶冷凍槽的干燥瓶內。