成都摩爾科學儀器有限公司提供的 氨基酸柱采用ODS鍵合硅膠為填充劑，填料采用高度可控的單分子層形成和封尾技術制備得到。通過柱前衍生化方法，18種氨基酸在柱上可獲得優異的分離。
olumn:Sepax AAA, 4.6×250 mm
phase:A: ACN : 0.1 M NaAc = 7 : 93 (v/v), pH=6.5; B: ACN : H2O = 80 : 20 (v/v)
Time (min): B (%):0 15 18 25 30 30.01 450 15 24 40 40 100 100
Flow rate:1.0 mL/min
Temperature:36 oC
Detection:UV 254nm
Injection Volume:5 µL
Sample:18 Amino acids
1.Asp 2.Glu 3.Ser 4.Gly 5.His 6.Arg
7.Thr 8.Ala 9.Pro 10.Tyr 11.Val 12.Met
13.Cys 14.Ile 15.Leu 16.Phe 17.Trp 18.Lys
氨基酸柱特點
1.氨基酸柱固定相以高純硅膠為基質，采用高純度鍵合試劑，通過創新*的技術確保zui大單分子層覆蓋和全封尾。
2.高度可控的單分子層形成和封尾技術保證了可靠的柱間重現性。
3.填料表面覆蓋zui大化，因此具有優異的穩定性。
4.填料為均一的球形顆粒，孔徑為120Å。通過運用*的填裝技術裝填得到的色譜柱柱床密度均一穩定，可保證具有zui高的柱效。
氨基酸柱訂購信息
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Sepax AAA (氨基酸分析) 色譜柱手冊色譜柱信息
Sepax AAA (氨基酸分析) 色譜柱專為分離與分析游離氨 基酸而設計。該柱以硅膠基質反相固定相材料為填料。Sepax AAA 固定相以高純度具有良好機械穩定性的硅膠為基質，采 用高純度鍵合試劑，通過創新*的技術確保zui大單分子層 覆蓋和全封尾。 高度可控的單分子層形成和封尾技術保證了 可靠的柱間重現性。Sepax AAA表面覆蓋率已達到zui大化， 因此具有優異的穩定性。該填料為均一的球形顆粒，孔徑為 120 Å，比表面積為 300 m2 /g。 通過運用*的勻漿填裝技術裝填得到的Sepax AAA柱柱床密度均一穩定，因此可保證具 有zui高的柱效。通過PITC 衍生化方法，18種氨基酸可在Sepax AAA 柱獲得高分辨率的快速分析。
色譜柱的安裝和操作
色譜柱在運輸過程中或在沒有使用時，它的兩端總是用 堵頭進行密封。當將色譜柱接入色譜儀器系統時，首先移去 兩端的堵頭。請注意將流動相流動的方向與柱上標記的方向 保持*。除非出于特殊考慮，例如為了清除堵在色譜柱入 口端的臟污等而需要將色譜柱反接以進行沖洗時，建議用戶 在接上色譜柱時一定要遵循柱上標記的方向。由于色譜柱的 連接是整個色譜操作過程的一部分，如果密封卡套過緊，或 安裝不合適，或者密封卡套與色譜柱端口不匹配，都有可能 導致溶液的泄漏。請按照下面步驟將色 ，從而將色譜柱接入 HPLC 系統： (a) *次使用的管線，請依次將管線接頭和密封卡套裝在 徑 1/16"的管線上。密封卡套的寬口端應朝向管線接頭。 (b) 將管線緊緊插入色譜柱的接口，向前滑動密封卡套和管 線接頭，并使管線接頭的 ，然后擰緊管線接頭。 (c) 在用力將管線壓入 螺帽再進一步緊固。 ) 對色譜柱的另一端采用上述方法進行操作。 新的 Sepax AAA 柱是置于甲醇（或乙腈）水溶液中運輸 的，在儲存和運輸過程中，硅膠填料可能會干涸。這時* 用 10-20 倍柱體積的純有機溶劑如甲醇、乙腈進行沖洗以活化色譜柱。接著可用用戶自己選擇的流動相沖洗色譜柱。流 速由 0.1mL/min 逐漸升至所需的操作條件，直至基線穩定為 止。如果柱壓和基線波動較大，這可能是氣泡進入了色譜柱中這時可用較高流速沖洗色譜柱 2-5 分鐘，例如對于 4.6x250 mm 的色譜柱可采用流速 1.5mL/min。
樣品和流動相
為了避免色譜柱的堵塞，所有樣品和溶劑，包括緩沖溶 液在內，都必須在使用前用 0.45 μm 或 0.2 μm 的濾膜過濾。 Sepax AAA 鍵合固定相的性質為非極性，*流動相為有機 試劑與水的混合物（如甲醇或乙腈的水溶液等）。流動相在 使用前需要脫氣。一個簡單的脫氣方法是將流動相在水泵形成的真空下超聲 5 min。當 Sepax AAA 柱用于梯度洗脫 時，起始流動相通常為 5%甲醇（或乙腈）。
色譜柱的保護
pH 避免在 pH 低于 2 或高于 11 的條件下使用 Sepax AAA 柱。較高的 pH 會溶解硅膠，從而使部分或全部的烷基 鏈從硅膠表面脫落，引起分離效率的 。為了獲得zui大的分離效果和延長柱的使用壽命，請盡量 使用 pH 在 3 - 7.5 范圍內的流動相。
壓力 盡管 Sepax AAA 柱可在高至 5000psi 的壓力下使 用，但正常的操作壓力應當低于 3000psi。長時間在高壓下運 行會損壞色譜柱和*。由于壓力來源于流速，因此zui大 流速將受制于系統所能承受的壓力。一般而言，柱壓會隨著 色譜柱使用時間的增加而逐漸增加。壓力突然增加預示色譜柱入口端的篩板發生了堵塞。在這種情況下，建議將色譜柱 反接后用適宜的溶劑進行沖洗。
溫度
zui高操作溫度為 60o C。長時間在高溫(>75o C)下操作 也會損壞色譜柱，這種情形在高的pH (>8)條件下特別突出。
儲藏 *不用時，請不要讓水或緩沖液存留在色譜柱 中。在替代緩沖液時，請用至少 20-30 倍柱體積的 50%甲醇 （或乙腈）水溶液沖洗色譜柱，再用 20-30 倍柱體積的純有機溶劑如已睛進行沖洗。。每根色譜柱在運輸過程中均會附有 兩個可拆卸的堵頭。為了防止柱床干涸，請用堵頭塞緊色譜柱的兩端。
Sepax’s AAA 反 過 色譜柱氨基酸分析步驟
1. 原理 這種分析氨基酸的方法基于柱前衍生步驟，衍生化反應 是在堿性條件下完成的，采用異硫氰酸苯酯和游離氨基酸 應生成的 PTC-氨基酸衍生物可于 UV 254 nm 處被檢測到。通 PITC 衍生法改善的氨基酸分離同樣使其分析更有效。
