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GR/TL988 GR/TL988 北京熒光定量PCR儀

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  • 型號(hào)GR/TL988
  • 品牌
  • 所在地北京市
  • 更新時(shí)間2024-06-15
  • 廠商性質(zhì)
  • 所在地區(qū)
  • 實(shí)名認(rèn)證已認(rèn)證
  • 產(chǎn)品數(shù)量1005
  • 人氣值6249
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北京熒光定量PCR儀應(yīng)用領(lǐng)域臨床疾病診斷:各型肝炎、艾滋病、、結(jié)核、性病等傳染病診斷和療效評(píng)價(jià);地中海貧血、血友病、性別發(fā)育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優(yōu)生優(yōu)育檢測(cè);腫瘤標(biāo)志物及瘤基因檢測(cè)
GR/TL988 北京熒光定量PCR儀 產(chǎn)品詳情
北京熒光定量PCR儀

型號(hào):GR/TL988

北京熒光定量PCR儀應(yīng)用領(lǐng)域臨床疾病診斷:各型肝炎、艾滋病、、結(jié)核、性病等傳染病診斷和療效評(píng)價(jià);地中海貧血、血友病、性別發(fā)育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優(yōu)生優(yōu)育檢測(cè);腫瘤標(biāo)志物及瘤基因檢測(cè)實(shí)現(xiàn)腫瘤病診斷;遺傳基因檢測(cè)實(shí)現(xiàn)遺傳病診斷。

動(dòng)物疾病檢測(cè):、新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲(chóng)病等、炭疽芽孢桿菌。

北京熒光定量PCR儀食品安全:食源微生物、食品過(guò)敏源、轉(zhuǎn)基因、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測(cè)。

科學(xué)研究:醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧、生物相關(guān)分子生物學(xué)定量研究。

應(yīng)用行業(yè):各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、大學(xué)及研究所、CDC、檢驗(yàn)、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠等。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR的出現(xiàn),大地簡(jiǎn)化了定量檢測(cè)的過(guò)程,而且真正實(shí)現(xiàn)了定量。多種檢測(cè)系統(tǒng)的出現(xiàn),使實(shí)驗(yàn)的選擇性更強(qiáng)。自動(dòng)化操作提高了工作效率,反應(yīng)快速、重復(fù)性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果清晰。隨著生物芯片技術(shù)和熒光探針定量技術(shù)的結(jié)合,熒光定量PCR在醫(yī)學(xué)檢測(cè)及其他各個(gè)領(lǐng)域中的應(yīng)用前景將更加廣闊,令人欣喜。盡管如此我們也應(yīng)清晰認(rèn)識(shí)到,F(xiàn)Q-PCR技術(shù)在我國(guó)各個(gè)研究領(lǐng)域的應(yīng)用并不多見(jiàn),這就需要我國(guó)學(xué)者迎頭趕上,使FQ-PCR技術(shù)更充分地推廣,以推動(dòng)研究工作的快速發(fā)展。

熒光定量PCR 實(shí)驗(yàn)步驟:

樣品RNA的抽提折疊

①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

RNA質(zhì)量檢測(cè)折疊


1)紫外吸收法測(cè)定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

① 濃度測(cè)定

A260下讀值為1表示40 μg RNA/ml。樣品RNA濃度(μg/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 μg/ml。具體計(jì)算如下:

RNA溶于40 μl DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495μl的TE中,測(cè)得A260 = 0.21

RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 μg/ml = 840 μg/ml 或 0.84 μg/μl

取5ul用來(lái)測(cè)量以后,剩余樣品RNA為35 μl,剩余RNA總量為:

35 μl × 0.84 μg/μl = 29.4 μg

②純度檢測(cè)

RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。

2)變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定

①制膠

1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% (12.3 M)。

10×MOPS電泳緩沖液

濃度 成分

0.4M MOPS,pH 7.0

0.1M 乙酸鈉

0.01M EDTA

灌制凝膠板,預(yù)留加樣孔至少可以加入25 μl溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內(nèi),加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。

②準(zhǔn)備RNA樣品

取3μgRNA,加3倍體積的甲醛上樣染液,加EB于甲醛上樣染液中至終濃度為10μg/ml。加熱至70℃孵育15分鐘使樣品變性。

③電泳

上樣前凝膠須預(yù)電泳5min,隨后將樣品加入上樣孔。5–6V/cm電壓下2h,電泳至溴酚蘭指示劑進(jìn)膠至少2–3cm。

④紫外透射光下觀察并拍照

28S和18S核糖體RNA的帶非常亮而濃(其大小決定于用于抽提RNA的物種類型),上面一條帶的密度大約是下面一條帶的2倍。還有可能觀察到一個(gè)更小稍微擴(kuò)散的帶,它由低分子量的RNA(tRNA和5S核糖體RNA)組成。在18S和28S核糖體帶之間可以看到一片彌散的EB染色物質(zhì),可能是由mRNA和其它異型RNA組成。RNA制備過(guò)程中如果出現(xiàn)DNA污染,將會(huì)在28S核糖體RNA帶的上面出現(xiàn),即更高分子量的彌散遷移物質(zhì)或者帶,RNA的降解表現(xiàn)為核糖體RNA帶的彌散。用數(shù)碼照相機(jī)拍下電泳結(jié)果。

關(guān)鍵詞:光度計(jì)
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