| 產(chǎn)品名稱：CRISPR基因敲除試劑盒

| 產(chǎn)品貨號(hào)：Cas9x3.0

| 產(chǎn)品介紹

CRISPR基因敲除試劑盒(Cas9x3.0)是海星生物在多年基因編輯服務(wù)的基礎(chǔ)上研發(fā)的高效快捷的基因敲除試劑盒。包括了人(Human) 和小鼠(Mouse)的所有基因的敲除。

Cas9x3.0試劑盒包含2個(gè)Cas9X™算法優(yōu)化的 gRNA序列載體和特異的同源DNA片段，DNA片段含有抗性和GFP 熒光，并攜帶有一段特殊同源序列，不僅可為后續(xù)基因敲除細(xì)胞的篩選提供藥物抗性，也可以通過(guò)流式篩選獲得敲除細(xì)胞。

Cas9x3.0試劑盒對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞都有非常高的敲除效率。

| 產(chǎn)品特點(diǎn)

敲除高效率——比病毒敲除方式更實(shí)惠、更穩(wěn)定、更安全

實(shí)驗(yàn)超簡(jiǎn)單——操作流程簡(jiǎn)單，能養(yǎng)好細(xì)胞就能做基因敲除

| 產(chǎn)品構(gòu)成

| 產(chǎn)品原理

CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)依據(jù)HDR和 NHEJ修復(fù)原理進(jìn)行產(chǎn)品開(kāi)發(fā)。

  優(yōu)化的gRNA引導(dǎo)Cas9蛋白對(duì)特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，產(chǎn)生DNA 雙鏈斷裂（Double-Strａnd Break, DSB），并誘導(dǎo)同源線性化DNA片段（攜帶抗性基因和熒光基因）整合到該位點(diǎn)，再通過(guò)抗性藥物（puroR ）或熒光（GFP）進(jìn)行篩選，從而獲得基因敲除的細(xì)胞和單克隆。

   CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0) 的敲除效率是傳統(tǒng)基因敲除策略的2~5倍。因?yàn)槠涞那贸呗允峭ㄟ^(guò)在基因位導(dǎo)入 Donor DNA（ puroR & GFP ）從而達(dá)到敲除目的蛋白效果，同時(shí)也可以在DSB位點(diǎn)導(dǎo)入序列移碼，導(dǎo)致蛋白翻譯提前終止。這兩個(gè)原理的疊加，可以輕松獲得“等位基因”純合敲除細(xì)胞株。

| 應(yīng)用流程

 CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)操作步驟(脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法)：

本試劑盒建議采用轉(zhuǎn)染試劑是Lipofectamine® 2000 Reagent (cat#11668-030)，具體參照轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明材料。不同類(lèi)型的轉(zhuǎn)染試劑，請(qǐng)按照制造商的操作說(shuō)明進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

注意：懸浮細(xì)胞不推薦使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法。

CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)操作步驟(電轉(zhuǎn)化法)：

 本試劑盒推薦Neon轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，具體參照設(shè)備對(duì)每種細(xì)胞參數(shù)。不同類(lèi)型的電轉(zhuǎn)設(shè)備，請(qǐng)按照制造商的操作說(shuō)明進(jìn)行優(yōu)化。

注意：懸浮細(xì)胞推薦使用電轉(zhuǎn)化法。

CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)配有eGFP對(duì)照DNA，可以按照實(shí)際使用的方法和細(xì)胞情況，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)摸索，建議48小時(shí)后的目的細(xì)胞的eGFP的陽(yáng)性率不低于50%， Cas9x3.0試劑盒才能獲得良好的敲除效果。