sybr green熒光染料-熒光定量PCR
一、SYBR Green 熒光染料熒光定量PCR 原理
SYBR Green 熒光染料 I 與 dsDNA 結(jié)合熒光信號(hào)可增強(qiáng) 800—1000 倍。在 PCR 反應(yīng)體系中，加入 適量 SYBR Green I 熒光染料，SYBR 熒光染料特異性地?fù)饺?DNA 雙鏈后，熒光信號(hào)增強(qiáng)，而不 摻入鏈中的 SYBR Green I 染料分子熒光不變，從而保證熒光信號(hào)的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加同步。熒光可以在退火階段或者延伸階段測(cè)定。
二、使用方法：
我們提供的為 20×的濃縮液，使用時(shí)可稀釋 20—100 倍，使反應(yīng)的終濃度為 1×到 0.2× 之間。例如配 50ul 總體積的 PCR 反應(yīng)液，應(yīng)加 20×的 SYBR Green I 染料 0.5ul—2.5ul。
三、使用濃度對(duì)熒光 PCR 結(jié)果的影響
SYBR Green 熒光染料 熒光定量 PCR 的試驗(yàn)成功有很多因素，但是 SYBR Green I 的使用濃度是非 常關(guān)鍵的因素 ，如果 SYBR Green I 的濃度過低會(huì)使熒光信號(hào)的變化降低。這就意味著低拷貝 的樣品可能無法檢出；而在高濃度時(shí)，將會(huì)抑制 PCR 反應(yīng)。降低 PCR 反應(yīng)效率。所以一般在使 用 SYBR Green I 時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況優(yōu)化使用濃度。
四、鎂離子濃度的影響
提高鎂離子濃度可以降低 SYBR Green I對(duì) PCR 反應(yīng)的抑制作用。我們建議在用 SYBR Green I 進(jìn)行熒光 PCR 反應(yīng)時(shí)，鎂離子濃度要比無 SYBR Green I 的普通 PCR 反應(yīng)要高出 0.5 至 3mM。
五、SYBR Green 熒光染料 僅供科研使用。
六、保存方法
避光，4 度運(yùn)輸，-20 度保存有效期 2 年。
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