天根試劑-快速質粒小提試劑盒-DP105

產品簡介

天根試劑-快速質粒小提試劑盒-DP105采用硅膠膜吸附技術，結合質粒DNA，操作簡單、快速。每次處理1-4 ml 過夜培養的細菌培養液，僅需 8 min 即可提取多至24 μg 的質粒DNA。使用本試劑盒提取的質粒DNA 可適用于各種常規操作，包括酶切、PCR、測序、連接、轉化、 文庫篩選、體外翻譯、轉染一些常規的傳代細胞等。

產品特點：

■ 快速：步驟少，操作簡單，僅需8 min。

■ 高效：可提取菌體85% 以上質粒DNA。

■ 配備了的TIANRed 試劑，可以清晰辨明抽提過程中樣本的裂

解程度，確保得到高效率、高純度的質粒DNA。

提取得率

快速質粒提取試劑盒顏色變化

使用注意事項

 請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。 

1．溶液P1在使用前先加入RNase A和TIANRed（將試劑盒中提供的RNase A和TIANRed全 部加入），混勻，置于2-8℃保存。 2．使用前請先檢查溶液P2和P5是否出現渾濁，如有混濁現象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄清。 

3．注意不要直接接觸溶液P2和P5，使用后應立即蓋緊蓋子。 

4．所有離心步驟均為使用常規臺式離心機室溫下進行離心，速度為12,000 rpm (~13,400×g )。

5．提取的質粒量與細菌培養濃度、質粒拷貝數等因素有關。

 6． TIANRed的使用方法： TIANRed是一種指示劑，用以指示整個操作的正確性，對人體無 害。使用時按照TIANRed:溶液P1=1:200進行混合，顛倒混勻，混勻后的溶液為澄清 的紅色。將混勻后的溶液加入到收集好的菌體中混勻，由于菌體的存在，混勻后的溶液為渾濁的紅色；添加溶液P2之后混勻后，溶液的顏色為澄清的紫色，則說明充 分裂解；再添加溶液P5至混勻后，溶液為澄清的黃色，說明中和復性充分。

實驗操作步驟說明：

 使用前請先在漂洗液PWT中加入CH2O6，加入體積請參照瓶上的標簽。

 1. 取1-4 ml過夜培養的菌液，加入離心管中，使用常規臺式離心機，12,000 rpm (~13,400×g )離心1 min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集 到一個離心管中）。

 2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入150 μl溶液P1（請先檢查是否已加入RNase A和 TIANRed），使用移液器或渦旋振蕩器懸浮細菌沉淀。 注意：如果有未混勻的菌塊，會影響裂解，導致提取量和純度偏低。 

TIANRed試劑的加入對于后續PCR、酶切和測序都沒有影響。使用時按照TIANRed:溶液 P1=1:200進行混合，顛倒混勻，混勻后的溶液為澄清的紅色。將混勻后的溶液加入 到收集好的菌體中混勻，由于菌體的存在，混勻后的溶液為渾濁的紅色。 

3. 向離心管中加入150 μl溶液P2，溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解。 注意：溫和地混合，不要劇烈震蕩，以免污染基因組DNA。此時菌液應變得清亮粘稠，如果 未變得清亮，可能由于菌體過多，裂解不，應減少菌體量。 由于使用了TIANRed，添加溶液P2混勻后，溶液的顏色為澄清的紫色。如果在紫色中 混雜有渾濁的紅色，則說明裂解不充分，繼續混勻直至溶液顏色變為澄清的紫色。 

4. 向離心管中加入350 μl溶液P5，立即快速地上下顛倒混勻12-20次，混勻，此時將出 現絮狀沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 離心2 min。

 注意：加入溶液P5后應立即混合，應快速上下顛倒混勻，避免產生局部沉淀。上清中含 有少量微小白色沉淀對后續實驗沒有任何影響。如果上清中存在大量微小白色沉淀，可 再次離心后取上清。由于使用了TIANRed，添加溶液P5混勻后，溶液為澄清的黃 色，如果在黃色中混有紫色，則說明復性不充分，繼續混勻至溶液顏色變為澄清的 黃色。 

5. 將上一步收集的上清液用移液器轉移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），注意盡量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g) 離心30 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CP3放入收集管中。

6. 向吸附柱CP3中加入300 μl漂洗液PWT，12,000 rpm (~13,400×g) 離心30 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP3放入收集管中。 

7. 將吸附柱CP3放入收集管中, 12,000 rpm (~13,400×g) 離心1 min，目的是將吸附柱中殘 余的漂洗液去除。

8. 將吸附柱CP3置于一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位滴加50-100 μl洗脫緩沖液 TB，12, 000 rpm (~13,400×g) 離心30 sec將質粒溶液收集到離心管中。 

注意：洗脫緩沖液體積不應少于50 μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有較大影響。