微生物生長量的測定方法！

微生物生長量的測定方法！

微生物體積很小，測定個體生長很困難，也沒有太大意義。通常微生物的生長是指群體的生長，微生物生長量是指在一定條件下微生物經過培養后群體的生長量。

測定生長量的方法有許多種，可以直接測量培養物的體積或質量，也可以通過測量細胞組分含量或濁度等指標來間接獲得微生物的量。

一、直接法

⒈測體積

它是一種較為粗放的方法，通常用于初步的測定。

操作方法如下：將待測培養液放在刻度離心管中作自然沉降或進行一定時間的離心，然后觀察沉降物的體積。

⒉稱干重

采用離心法或過濾法測定，一般干重為濕重的10%-20%,一個細菌一般重10-12

~10-13g。

⑴離心法：將待測培養液離心，再用清水洗滌離心1~5次后干燥，可用105℃、100℃或紅外線烘干，也可在較低的溫度(-80℃或-40℃)下進行真空干燥，然后稱干重。

⑵過濾法：如為絲狀真菌可用濾紙過濾，如為細菌可用乙酸纖維膜等濾膜進行過濾。過濾后，細胞可用少量水洗滌，再真空干燥(-40℃以下),稱干重。一般在液體培養基中，細菌的濃度的數量級大約為108CFU/mL, 100 mL培養物可獲得10 mg ~300 mg干重的細菌。

二、間接法

⒈代謝指標法

微生物生長過程中伴隨著的物質合成與利用，因此很多代謝指標與細菌生長量相關，這些指標可用作生長測定的相對值。

大多數細菌的含氮量約為干重的12.5% ,酵母菌約為7.5% ,霉菌約為6.0%.總氮在細胞粗蛋白中的含量也較為穩定。因此，培養物含氮量可以近似反應生長量。含氮量的測定方法有很多，常用凱氏定氮法。此法適用于細胞濃度較高的樣品，操作過程較繁鎖。

微生物新陳代謝過程中離不開碳元素。測定培養物含碳量的方法如下：將培養物混入1ml水或無機緩沖液中，用2 mL2%重鉻酸鉀溶液在100 ℃下加熱30 min,冷卻后，加水稀釋至5 mL,在580 nm波長下測定光密度值(用試劑作空白對照，并用標準樣品作標準曲線),即可推算出生長量。

微生物細胞內的其他成分，如磷、DNA、RNA、ATP和N-乙酰胞壁酸等的含量，以及產酸、產氣、產二氧化碳(用標記葡萄糖作基質)、耗氧、黏度和產熱等指標，也都可以用于生長量的測定。

⒉比濁法

微生物在液體培養基中生長，由于個體體積和細胞數量的增加，引起培養物混濁度的增高。通過測定培養物的濁度可以近似推斷其生長量。

比濁法通常采用McFarland比濁管，用不同濃度的氯化鋇與稀硫酸配制成的10支試管，其中形成的有10個濃度梯度，分別對應10個相對的細菌濃度(預先用相應的細菌測定)。某一未知濃度的菌液在透射光下用肉眼與某一比濁管進行比較，如果兩者的濁度相當，即可目測出該菌液的大致濃度。如要精確測定培養物的濁度，則需要用分光光度計進行。在可見光的450 nm -650 nm波長內均可測定。

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