ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實驗過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作，必能得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)！
產(chǎn)品名稱 | ASM人酸性神經(jīng)鞘磷脂酶ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human acid sphingomyelinase, ASM Elisa Kit |
貨號 | FS-H63899 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購優(yōu)勢如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全：生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
樣本實驗前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
3,3'-Dipentyloxacarbocyanineiodide(DiOC5(3))英文名稱: 3,3'-Dipentyloxacarbocyanine iodide (DiOC5(3)): 53213-81-3-氨基-1,3,6-萘三磺二鈉鹽別名: 8-氨基萘-1,3,6-三磺二鈉鹽;1-萘胺-3,6,8-三磺二鈉鹽英文名稱: 8-Aminonaphthalene-1,3,6-trisulfonic acid disodium salt: 5398-34-5分子式: C10H7NNa2O9S3
茜素黃R別名: 對硝基偶氮水楊;媒介橙1;5-(4-硝基基偶氮)水楊英文名稱: Alizarin yellow R: 2243-76-7分子式: C13H9N3O5
桿菌肽鋅英文名稱: Bacitracin zinc: 1405-89-6分子式: C66H101N17O16SZn分子量: 1486.07
性橙2別名: 柯衣定G4-基偶氮-1,3-二胺單鹽鹽黃叱精Y英文名稱: Basic Orange2: 532-82-1分子式: C12H12N4·HCl
氧化鈰別名: 氧化鈰/納米氧化鈰;二氧化鈰，氧化高鈰，二氧化鈰英文名稱: Cerium oxide: 1306-38-3分子式: CeO2
百菌清別名: 百菌清;四間二甲，四間二，2,4,5,6-四鄰二甲英文名稱: Chlorothalonil: 1897-45-6分子式: C8Cl4N2
2-（5-溴-2-吡偶氮）-5-（二乙氨基）酚別名: 2-(4-乙氨基-2-羥基偶氮)-5-溴吡;(5-溴-2-吡)偶氮-5-(二乙氨基)酚;溴代2-吡基-二乙氨基酚英文名稱: 5-Br-PADAP: 14337-53-2分子式: C15H17BrN4O
ASM人酸性神經(jīng)鞘磷脂酶ELISA試劑盒實驗原理Apollon/FITC 熒光素標(biāo)記Apollon凋亡抑制蛋白抗體IgG轉(zhuǎn)錄因子AP2α+β抗體1-氨基-1-環(huán)己Mouse PAP (Plasmin-Antiplasmin Complex) ELISA Kit
APP/FITC 熒光素標(biāo)記APP淀樣肽前體蛋白抗體IgG磷化腺瘤樣息肉抗體1-(2-氨基乙基)Mouse PAI-1 (Plasminogen Activator Inhibitor 1) ELISA Kit
phospho-APP(phospho Thr668) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、鼠磷化APP淀樣肽前體蛋白（p-APP Thr668）抗體IgG磷化周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體1-(2-氨基乙基)Mouse PAI-2 (Plasminogen Activator Inhibitor 2) ELISA Kit
APP695/770 /FITC 熒光素標(biāo)記淀樣肽前體蛋白抗體IgG周期后期促進(jìn)蛋白亞基10抗體2-溴乙基基溴化銨Mouse tPA (Plasminogen Activator, Tissue) ELISA Kit
APPL1/FITC 熒光素標(biāo)記抗銜接因子蛋白含pH域磷酪氨結(jié)合域和亮氨拉鏈基元1抗體IgG周期后期促進(jìn)蛋白亞基11抗體2-溴乙基基溴化銨Mouse PAF (Plaet Activating Factor) ELISA Kit
APS/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、鼠APS抗體IgG腺瘤性結(jié)腸息肉病蛋白2抗體3-甲基-2-環(huán)戊烯-1-Mouse PDGFC (Plaet Derived Growth Factor C) ELISA Kit
APS(Ser598)/FITC 熒光素標(biāo)記磷化APS抗體IgG磷化分裂周期蛋白16抗體3-甲基-2-環(huán)戊烯-1-Mouse PDGFD (Plaet Derived Growth Factor D) ELISA Kit
AQP1/FITC 熒光素標(biāo)記水通道蛋白-1抗體IgGDNA修復(fù)酶相互作用蛋白抗體替洛隆Mouse PDGFRL (Plaet Derived Growth Factor Receptor Like Protein) ELISA Kit
操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
