使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
參數規格：
產品名稱：新兇手弗朗西斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Francisella novicida
貨號：CP914372
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
原理:
新兇手弗朗西斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，產品僅用于科研Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。
特點優勢：
1. 特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過TIANDZ及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到。
2. 重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為。
3. 靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
熒光定量PCR實驗步驟：
①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是新兇手弗朗西斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒的相關產品：
Sodium 1-hexanesulfonate1-己25克生物技術級，99.8%
Sodium 1-heptanesulfonate1-庚1克BR
Sodium 1-decanesulfonate1-癸100毫克超純，99.5%
Sodium 1-butanesulfonate1-100毫克BR，99%
Sodium 1,5-naphthalenedisulfonate dibasic1,5-萘二0.25毫升BR，99%
Soda lime蘇打石灰30毫升AR，99%
Soda asbestos堿石棉10克CP，
SOD過物歧化酶500克BR，150u/mg，Type I
Snailase蝸牛酶25克BR，300u/mg，懸浮液
Snailagglutinin蝸牛凝集素100克BR，Ⅰ型，>125CDU/mg
SMZ惡唑1克分子生物學
SLSN-月桂酰肌25毫克IND
Sirius Rose BB天狼星玫紅BB10毫克高純，
Simazine西瑪1KU高純，100mM
Silver tungstate鎢銀25克CP
去甲氧基姜黃素 英文名稱：Demethoxycurcumin 號：22608-11-3 規格：20mg
雙去氧基姜黃素 英文名稱：Bisdemethoxycurcumin 號：24939-16-0 規格：20mg
二乙烯苷 英文名稱：2,3,5,4-tetrahydroxyl diphenylethylene-2-o-glucoside 號：82373-94-2 規格：20mg
3,29-二甲酰基栝樓仁三醇 英文名稱：3,29-Dibenzoyl rarounitriol 號：873001-54-8 規格：10mg
β，β’-二甲基丙烯酰阿卡寧 英文名稱：β, β-dimethyl-acry-lalkannin 號：34539-65-6 規格：20mg
紫草素 英文名稱：Shikonin 號：517-89-5 規格：20mg
紫草苷 英文名稱：Lithosprmoside 號：63492-69-3 規格：20mg
二氫辣椒素 英文名稱：Dihydrocapsaicin 號：19408-84-5 規格：20mg
辣椒素 英文名稱：Capsaicin 號：2444-46-4 規格：20mg
天然辣椒素(98%) 英文名稱：Capsaicinoids 號：404-86-4 規格：20mg
新兇手弗朗西斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒Oxypeucedanin 氧化前胡素(標準品) 規格：HPLC≥98%，標準品
Croaline;Monocroaline 野百合堿（標準品） 規格：HPLC≥98%，標準品
Scullarin 野黃芩苷(標準品） 規格：HPLC≥98%，標準品
Scullarein 野黃芩素(標準品) 規格：HPLC≥98%，標準品
8-O-Aceylshanzhisidemehylesr 8-O-乙酰山梔苷甲酯（標準品） 規格：HPLC≥98%，標準品
Aceylcorynoline 乙酰紫堇靈（標準品） 規格：HPLC≥98%，標準品
3-Hydroxy-4-mehoxycinnamicacid 異阿魏酸（標準品） 規格：HPLC≥98%，標準品
Isobavachalcone 異補骨脂查爾酮;補骨脂乙素 規格：HPLC≥98%，標準品
Isobavachin 異補骨脂二氫黃酮（標準品） 規格：HPLC≥98%，標準品
Angicin 異補骨脂素(標準品) 規格：HPLC≥98%，標準品
Isobergapn 異佛手柑內酯 規格：HPLC≥98%，標準品
Isoliquiriin 異甘草苷（標準品） 規格：HPLC≥98%，標準品
Ramaroban;BAYu3405 雷馬曲班 規格：HPLC≥98%，標準品
Isorhynchophylline 異鉤藤堿(標準品) 規格：HPLC≥98%，標準品
luolin-6-C-glucoside 異葒草苷(標準品) 規格：HPLC≥98%，標準品
