禽腺病毒E型探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，產(chǎn)品僅用于科研請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
相對定量簡介：
分析方法： ①雙標(biāo)曲法 ②2 － △Ct ③2 － △△Ct ④Pfaffi法
①雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法簡介
公式：
優(yōu)點(diǎn)：分析簡單，實(shí)驗(yàn)優(yōu)化簡單
缺點(diǎn)：對每一個(gè)基因，每一輪實(shí)驗(yàn)都必需做標(biāo)準(zhǔn)曲線；必需有固定的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線；這些標(biāo)準(zhǔn)品并不代表樣品擴(kuò)增的真實(shí)狀態(tài)應(yīng)用：基因表達(dá)調(diào)控研究中與*的兩種相對定量方法之一

樣品要求及注意事項(xiàng)：
1、 如果提供實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)材料必須保證新鮮，請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑，并用干冰運(yùn)輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ，也可以將樣品研磨后放在 Trigol中，動(dòng)植物組織 ： 50～100mg/mlTrigol，貼壁細(xì)胞：10cm2/mlTrigol，懸浮細(xì)胞：5×106動(dòng)植物，酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進(jìn)行評(píng)估。
4、 實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

Sodium fluoride化25克CP，98.5%

Sodium D-pantothenate右旋泛100克CP，97.5%

Sodium dodecylbenzenesulfonate十二基-61克FMP

Sodium dodecanoate十二1克超純，99%

Sodium dodecanesulfonate月桂基100毫克色固，80%

Sodium DL-ma1ate trihydrateDL-蘋果水合物100毫克標(biāo)準(zhǔn)溶液，10ug/ml，u=6%

Sodium DL-ma1ateDL-蘋果25毫克分析標(biāo)準(zhǔn)品

Sodium DL-lactate2-羥基單鹽500UCP，

Sodium dihydrogen phosphate monohydrate磷一單水合物5克CP，

Sodium dichloroisocyanurate優(yōu)凈25克AR，99.5%

Sodium D-glucuronateD-葡糖2毫克 BR，

Sodium D-gluconate五羥基己25克BR，95%

Sodium decanoate癸1克USP級(jí)

Sodium Danshensu3-(3',4'-二羥基基)乳1公斤BR，粘度20 mPa.s

Sodium Cyclamate環(huán)己基基250毫克BR，

高黃芩素  英文名稱：Sculartln  號(hào)：529-53-3  規(guī)格：20mg

木犀草素-7-O-新橙皮糖苷（忍冬苷）  英文名稱：Luteolin 7-neohesperidoside  號(hào)：25694-72-8  規(guī)格：10mg

麥冬皂苷A  英文名稱：Ophiopogonin A  號(hào)： 11054-24-3  規(guī)格：10mg

麥冬皂苷B  英文名稱：Ophiopogonin B  號(hào)： 38971-41-4  規(guī)格：10mg

麥冬皂苷C  英文名稱：Ophiopogonin C   號(hào)：911819-08-4   規(guī)格：10mg

麥冬皂苷D  英文名稱：Ophiopogonin D  號(hào)：945619-74-9  規(guī)格：20mg

短葶山麥冬皂苷C  英文名稱：Liriope muscari baily saponins C  號(hào)：87480-46-4   規(guī)格：20mg

山麥冬皂苷B  英文名稱：Liriopesides B  號(hào)：182284-68-0  規(guī)格：20mg

魯斯可皂苷元  英文名稱：Ruscogenin  號(hào)：472-11-7  規(guī)格：20mg

多舌飛蓬苷  英文名稱：6’-O-Caffeoylerigeroside  號(hào)：  規(guī)格：10mg
禽腺病毒E型探針法熒光定量PCR試劑盒SchizandrinB　五味子乙素(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

SchisanherinA　五味子酯甲(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Sipeimine　西貝母堿（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Crocin　西紅花苷，α-藏花素(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

CrocinI　西紅花苷I（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

CrocinII　西紅花苷II（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

nuifolin　細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

AgrimolB　仙鶴草酚B（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Sanguinarine　血根堿(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Vanillicacid　香草酸(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Vanillicacid　香草酸　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

yphaneoside　香蒲新苷（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Diosmein-7-O-β-D-glucopyranoside　香葉木素-7-O-葡萄糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Sclareol　香紫蘇醇(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Berberine　小檗堿(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品