試劑配制
1、酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
服務(wù)：
我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要，比如在檢測(cè)范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求，而量身定制檢測(cè)試劑盒，有效控制檢測(cè)試劑成本。并可提供免費(fèi)代測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 人胃蛋白酶(Pepsin)ELISA檢測(cè)試劑盒 |
英文名稱 | Human pepsin (Pepsin) ELISA Kit |
貨號(hào) | YS-H12347 |
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
辣根過氧化物酶標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 0.1mlMouse Anti-human IgG(3D3)/HRP
Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 0.1mlMouse Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 555
FITC標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 0.3mlGoat Anti-Mouse IgM/FITC
Cy7標(biāo)記的羊抗人IgG 0.1mlGoat Anti-human IgG/Cy7
生物素標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 0.1mlMouse Anti-Goat IgG/Bio
膠體金標(biāo)記的小鼠抗牛IgG 0.5mlMouse Anti-Bov IgG/Gold
PE標(biāo)記的兔抗牛IgG 0.1mlRabbit Anti-Bov IgG/PE
Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗狗IgG 0.1mlRabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 350
Cy5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 0.1mlRabbit Anti-Guinea pig IgM/Cy5
Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1mlRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 488
APC標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 0.1mlRabbit Anti-mouse IgM/APC
羅丹明標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 0.3mlRabbit anti-MG IgG/RBITC
PE標(biāo)記的驢抗羊IgG 0.1mlDonkey Anti-Goat IgG/PE
蛋白酶激活受體-2激活肽 0.5mgPAR-2 AP (Protease-activated receptors-2 Activating polypeptide)
人胃蛋白酶(Pepsin)ELISA檢測(cè)試劑盒金剛乙胺 規(guī)格： 100mg
咪 規(guī)格： 100mg
五倍子 規(guī)格： 1g
華基 470-37-1 規(guī)格： 20mg
酒石酸美托洛爾 56392-17-7 規(guī)格： 100mg /支
維生素D2 規(guī)格： 100mg
磷酸二氫鉀 7778-77-0 規(guī)格： 100mg
酸羥喹 規(guī)格： 50mg
阿維A 規(guī)格： 50mg
異型南五味子丁素 規(guī)格： 20mg
乃近 規(guī)格： 500mg
地黃（生地黃） 規(guī)格： 2g
噴昔洛韋 39809-25-1 規(guī)格： 50mg
廣山楂葉 規(guī)格： 2g
操作步驟：
1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
